La détermination de la concentration des protéines est une technique essentielle dans tous les aspects des études sur les protéines et la protéomique. Le kit de dosage de la quantification des protéines inclut trois des dosages de protéines les plus utilisés et permet de les comparer directement, en montrant les avantages et les limites de chacun d'eux. Chaque dosage est disponible individuellement si la formation se concentre sur un dosage particulier, auquel cas il est impossible de le comparer aux autres. Les trois dosages abordés sont les méthodes de biuret, de Lowry et le bleu de Coomassie. Le kit de dosage de la quantification des protéines fournit tous les réactifs nécessaires à la réalisation de dosages de protéines, notamment des protéines-étalons pour une quantification précise, dans le cadre d'une activité de laboratoire. La présence d'agents sans protéine créant des interférences, tels que les sels et les détergents, est souvent un facteur sous-estimé de la quantification de protéines. Ce kit fournit des informations sur les agents de laboratoire courants ayant un effet sur les dosages de protéines, le raisonnement derrière leurs interférences et indique comment procéder pour y remédier. De plus, les étudiants apprennent à sélectionner un dosage pour différentes applications.
- Trois dosages de protéines ou en tant que dosages individuels
- Enseigne trois méthodes d'estimation très répandues : dosages de protéines Biuret, Lowry et Coomassie
- Comprendre les effets des agents de laboratoire courants sur l'estimation des protéines
En milieu alcalin, la chélation des ions cuivre (Cu2+) avec les liaisons peptidiques entraîne la réduction des ions cuivre (Cu2+) en ions cuivreux (Cu+). Ces derniers peuvent être détectés à l'aide du réactif de Folin Ciocalteu (acide phosphomolybdique/phosphotungstique). Cette méthode est plus communément connue sous le nom de méthode de Lowry. La réduction du réactif de Folin Ciocalteu en ions cuivreux (Cu+) produit une couleur bleue lisible à 650-750 nm. La quantité de couleur produite est proportionnelle à la quantité de liaisons peptidiques.
Le dosage des protéines à l'aide du bleu de Coomassie repose sur la liaison des molécules de protéines au colorant Coomassie dans des conditions acides. La liaison de la protéine au colorant génère une déviation spectrale, la couleur de la solution Coomassie passe du brun (absorbance maximum de 465 nm) au bleu (absorbance maximum de 610 nm). Le changement de densité de la couleur se lit à 595 nm et est proportionnel à la concentration en protéines.
Le test au biuret est un dosage de protéines basé sur l'ion cuivre. Les solutions de protéines sont mélangées à une solution alcaline de sel de cuivre et d'ions cuivre (Cu2+). Ce test est basé sur les interactions des ions cuivre et de la protéine dans une solution alcaline. Les interactions des ions cuivre (Cu2+) et de la protéine se traduisent par une couleur violette lisible à 545 nm. La quantité de couleur produite est proportionnelle à la concentration en protéines.
Autres éléments nécessaires : spectrophotomètre et cuvettes ou lecteur de microplaques et microplaque.
Information de livraison: Livrés avec les composants nécessaires pour des expériences pratiques sur six postes de travail pour 4 à 5 étudiants ou 24 à 30 étudiants. Guide de formation inclus et guides pour étudiants séparés.
